Анти-DFS70 антитела: обнаружение и значимость

 Системные аутоиммунные ревматические заболевания (SARD) встречаются редко и трудно диагностируются. Антинуклеарные антитела (ANAs) являются одним из важнейших серологических признаков при диагностическом обследовании пациентов с SARD. Однако, до 30% обследованных здоровых людей также имеют положительный результат теста на ANAs, и примерно в 50% этих случаев положительный результат теста на ANAs обусловлен анти-DFS70 антителами. Анти‑DFS70 антитела демонстрируют типичный плотный мелкогранулярный (DFS) рисунок на клетках HEp-2 и могут быть определены с помощью специфического иммунного анализа. Наличие изолированных анти-DFS70-антител, по-видимому, является серологическим признаком отсутствия у человека SARD.
 
Профессор M. Герольд

Системные аутоиммунные ревматические заболевания и антинуклеарные антитела

 Антинуклеарные антитела (АНА), направленные против внутриклеточных антигенов, выявляются у пациентов с различными аутоиммунными заболеваниями и являются важной частью процедуры диагностики. Наличие АНА в сыворотке относится к некоторым критериям классификации системных аутоиммунных ревматических заболеваний (CАРЗ), таких как системная красная волчанка (СКВ), синдром Шегрена и склеродермия. Анализ методом непрямой иммунофлюоресценции на клетках HEp-2 является рекомендуемым «золотым стандартом» для выявления АНА и позволяет выполнить тест на наличие антител к большому количеству возможных аутоантигенов, присутствующих в ядре и других клеточных компартментах. Многие из этих антител, выявляемых на клетках HEp-2, не имеют известной связи с конкретной патологией или заболеванием. Специфические аутоантитела демонстрируют характерный тип свечения. В последующем эти антитела идентифицируются различными аналитическими методами с использованием специфических антигенов. В отличие от анализа методом непрямой иммунофлюоресценции данные иммуноанализы позволяют выявить лишь ограниченное число аутоантител, имеющих известное клиническое или диагностическое значение. Неудивительно, что АНА, выявляемые методом непрямой иммунофлюоресценции, могут быть обнаружены и у здоровых людей. Обычно уровень АНА в сыворотке у лиц без CАРЗ ниже, чем у пациентов с аутоиммунными заболеваниями, и чтобы различать пациентов с CАРЗ и пациентов без CАРЗ определены пороговые уровни. Однако АНА могут быть первым признаком того, что пациент без клинических симптомов находится на ранней стадии CАРЗ – период до начала аутоиммунного заболевания, как это было описано для ревматоидного артрита, миозита и СКВ.  Тем не менее образцы сыворотки 20-30% здоровых людей, обследованных на наличие АНА методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием клеток HEp-2, дают положительный результат в зависимости от возраста человека и титра анализа. Примерно в половине таких АНА-положительных сывороток здоровых людей обнаруживаются антитела, направленные против антигена dense fine speckles 70 (DFS70). В качестве основной мишени был выбран фактор роста эпителия хрусталика (LEDGF), который также известен как ДНК-связывающий коактиватор транскрипции p75. Этот белок обладает рядом физиологических функций. В частности, DFS70/LEDGF способствует выживанию клеток и повышает их устойчивость к клеточному стрессу. Он является кофактором репликации ВИЧ посредством взаимодействия с активностью интегразы ВИЧ‑1. DFS70/LEDGF также высоко экспрессируется в опухолевой ткани предстательной железы.

Анти-DFS70 Антитела

 Анти-DFS70 антитела можно обнаружить в рамках рутинного скринингового теста на АНА методом непрямой иммунофлюоресценции на клетках HEp-2, демонстрирующего равномерно распределённое мелкогранулярное окрашивание ядер в клетках интерфазы и положительное мелкогранулярное свечение похожего вида в хромосомах митотических клеток (Рис. 1). Поскольку белок массой 70 кД был признан антигеном, соответствующие антитела были названы антителами против плотных мелких гранул 70 (анти-DFS70).

 Анти-DFS70 антитела были описаны у пациентов с разными хроническими воспалительными заболеваниями, однако связь с конкретным заболеванием установить не удалось. Изначально анти-DFS70 антитела были обнаружены среди АНА в сыворотке пациентов с интерстициальным циститом. Сравнение распространенности данного вида антител при различных заболеваниях выявило его наибольшую распространенность у пациентов из Японии с атопическим дерматитом (30%). В США выявлена чрезвычайно высокая распространенность у больных бронхиальной астмой (16%), а также при других аллергических заболеваниях и у пациентов с интерстициальным циститом (9%). У большого числа пациентов с очаговой алопецией также были выявлены анти-DFS70 антитела. В японском исследовании сыворотка 59 человек из 111 (53%) пациентов с очаговой алопецией показала положительный результат на АНА, среди них около 20% (22/111) были положительные на анти-DFS70 антитела. Также у пациентов с раком предстательной железы в повышенном количестве (18%) выявлялись анти-DFS70 антитела. Есть основания полагать, что расщеплённые фрагменты LEDFG/p75, образующиеся при отмирании опухолевых клеток предстательной железы, при определённых воспалительных условиях могут активировать аутоантитела.

 Обычно считается, что наличие аутоантител является признаком аутоиммунной реакции или аутоиммунного заболевания. Однако, похоже, что наличие анти-DFS70 антител не связано с наличием САРЗ или любой другой патологической аутоиммунной реакции.

 Поэтому, было предложено использовать анти-DFS70 антитела в качестве подходящего биомаркера для исключения САРЗ. Данное предложение во многом основано на наблюдениях, что анти-DFS70 антитела чаще обнаруживаются у лиц без признаков активных САРЗ, чем у пациентов с этими заболеваниями. Примечательно, что у здоровых людей титры анти-DFS70 обычно высокие (с титрами >1:640), а другие аутоантитела не выявляются. При последующем клиническом наблюдении в течение четырех лет у здоровых лиц с положительным тестом на анти-DFS70 антитела САРЗ не развивались. Пациенты с САРЗ и анти-DFS70 антителами (менее 3%), напротив, обычно имеют также положительный результат теста на другие болезнь-специфические антитела.

Разница в распределении анти-DFS70 антител в зависимости от возраста и пола

 Хорошо известно, что в целом, преобладание АНА с возрастом увеличивается. Причина этого неясна. Одно из многих предположений заключается в том, что повышенная встречаемость аутоантител у пожилых людей отражает естественное старение иммунной системы в процессе старения. На удивление, АНА против плотных мелких гранул (анти-DFS70 антитела) чаще встречаются у молодых людей, и с увеличением возраста количество лиц с положительным тестом на анти-DFS70 антитела уменьшается. Причина более низкой частоты встречаемости анти-DFS70 антител у пожилых людей неизвестна. Одной из возможных причин является то, что наша иммунная система лишь совсем недавно (в течение нескольких последних десятилетий) стала вырабатывать анти-DFS70 антитела в ответ на неизвестные воздействия.

 Распределение анти-DFS70 антител по полу также отличается с большим перевесом в сторону женского пола.

Предупреждение неправильных результатов

 Высокий титр анти-DFS70 антител в АНА-положительных образцах (являющийся причиной ложноположительного результата) может ввести врача в заблуждение, если он не учитывает, что анти-DFS70 антитела вероятно исключают наличие аутоиммунных заболеваний. Предполагается, что классификационные критерии САРЗ, включающие положительный тест на АНА, должны быть пересмотрены с учетом этого факта. Перед включением результата в диагностику САРЗ АНА-положительную сыворотку надо протестировать, чтобы удостовериться, что АНА не направлены против DFS70. DFS70-положительные образцы можно выявить методом непрямой иммунофлюоресценции на клетках HEp-2, если лаборанты обучены распознавать специфичный рисунок DFS70. Если при повторном исследовании АНА-положительных образцов с рисунком DFS70 не получено положительного результата ни по одному из известных болезнь-специфических подтипов, кроме анти-DFS70 антител, можно предположить наличие последних. Подтверждением служат специальные тесты с использованием рекомбинантного DFS70 для выявления специфических антител IgG. Доступны разные коммерческие тесты, включая и иммуноблотт для обнаружения аутоантител против DFS70 и других подтипов АНА.

Заключение

 О существование анти-DFS70 аутоантител известно уже несколько лет, но общий интерес к ним в клинических лабораториях возрос после появления в продаже специфических иммуноанализов для выявления анти-DFS70 антител. Примерно 1 из 5 образцов сыворотки здоровых людей, проанализированных на АНА, даёт положительный результат, причиной которого в большинстве случаев является наличие анти-DFS70 антител. Подтверждение с помощью специфического иммуноанализа выполняется, чтобы избежать дополнительных диагностических процедур, поскольку анти-DFS70 антитела не связаны с аутоиммунными заболеваниями.

Список литературы

1.       Avery TY, et al. Anti-nuclear antibodies in daily clinical practice: prevalence in primary, secondary, and tertiary care. J Immunol Res. 2014; 2014: 401739.

2.       Bizzaro N, et al. Antibodies to the lens and cornea in anti-DFS70-positive subjects. Ann N Y Acad Sci. 2007; 1107: 174–183.

3.       Daniels T, et al. Antinuclear autoantibodies in prostate cancer: immunity to LEDGF/p75, a survival protein highly expressed in prostate tumors and cleaved during apoptosis. Prostate 2005; 62: 14–26.

4.       Ganapathy V, Casiano CA. Autoimmunity to the nuclear autoantigen DFS70 (LEDGF): what exactly are the autoantibodies trying to tell us? Arthritis Rheum. 2004; 50: 684–688.

5.       Mahler M, Fritzler MJ. The clinical significance of the dense fine speckled immunofluorescence pattern on HEp-2 cells for the diagnosis of systemic autoimmune diseases. Clin Dev Immunol. 2012; 2012: 494356.

6.       Mahler M, et al. Importance of the dense fine speckled pattern on HEp-2 cells and anti-DFS70 antibodies for the diagnosis of systemic autoimmune diseases. Autoimmun Rev. 2012; 11: 642–645.

7.       Mahler M, et al. Anti-DFS70/LEDGF antibodies are more prevalent in healthy individuals compared to patients with systemic autoimmune rheumatic diseases. J Rheumatol. 2012; 39: 2104–2110.

8.       Mariz HA, et al. Pattern on the antinuclear antibody-HEp-2 test is a critical parameter for discriminating antinuclear antibody-positive healthy individuals and patients with autoimmune rheumatic diseases. Arthritis Rheum. 2011; 63: 191–200.

9.       Miyara M, et al. Clinical phenotypes of patients with anti-DFS70/LEDGF antibodies in a routine ANA referral cohort. Clin Dev Immunol. 2013; 2013: 703759.

10.   Okamoto M, et al. Autoantibodies to DFS70/LEDGF are increased in alopecia areata patients. J Autoimmun. 2004; 23: 257–266.

11.   Watanabe A, et al. Arthritis Rheum. 2004; 50: 892–900.

Автор статьи

Д-р Герольд Манфред, PhD

Инсбрукский медицинский университет, Терапевтическое отделение VI, 6020 Инсбрук, Австрия

E-mail: manfred.herold@i-med.ac.at

Ссылка на первоисточник ниже

Anti-DFS70 antibodies: detection and significance - Clinical Laboratory int. (clinlabint.com)